RESUMEN
Introdução: A lipoenxertia é um enxerto autólogo de células do tecido celular subcutâneo, que pode ser utilizada como técnica complementar na reconstrução mamária. Diante disso, a criopreservação de células-tronco mesenquimais provenientes de tecido adiposo (CTDAs) poderia ser uma maneira de realizar a coleta em um tempo cirúrgico e após realizar a lipoenxertia de forma fracionada. O dimetilsulfóxido (DMSO) é um criopreservante utilizado em pesquisas com células, porém é potencialmente tóxico, o que impossibilitaria a utilização de CTDAs criopreservadas na prática clínica. Novos criopreservantes celulares, sem toxicidade, vêm sendo descritos na literatura científica experimental, como as substâncias L-prolina e trealose. Com isso, esse trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de CTDAs criopreservadas com a combinação de L-prolina e trealose, em um período de até 90 dias. Método: Estudo experimental, no qual foram obtidas amostras de lipoaspirado provenientes de 9 pacientes. A fração celular foi processada e congelada com L-prolina (1,5M) + trealose (0,2M), ou com DMSO + soro fetal bovino (SFB), como controle. Após 30 e 90 dias, as amostras foram descongeladas e a viabilidade celular foi avaliada pela técnica de MTT. Resultados: A análise das CTDAs, após 1 e 3 meses de congelamento, indicou que as amostras tratadas com L-prolina + trealose apresentaram viabilidade semelhante àquelas preservadas com DMSO e SFB (p=0,444). Conclusão: A associação de L-prolina e trealose manteve CTDA viáveis por 30 e 90 dias de congelamento, podendo ser uma alternativa como criopreservante celular sem toxicidade e viabilizando o uso de lipoenxertia seriada.
Introduction: Fat grafting is an autologous graft of cells from subcutaneous tissue, which can be used as a complementary technique in breast reconstruction. Given this, the cryopreservation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) could be a way to collect them in one surgical procedure and after performing fractional fat grafting. Dimethyl sulfoxide (DMSO) is a cryopreservative used in cell research, but it is potentially toxic, which would make it impossible to use cryopreserved ADMSCs in clinical practice. New cellular cryopreservatives, without toxicity, have been described in the experimental scientific literature, such as the substances L-proline and trehalose. Therefore, this work aimed to evaluate the viability of ADMSCs cryopreserved with the combination of L-proline and trehalose over up to 90 days. Method: Experimental study in which lipoaspirate samples were obtained from 9 patients. The cellular fraction was processed and frozen with L-proline (1.5M) + trehalose (0.2M) or with DMSO + fetal bovine serum (FBS) as control. After 30 and 90 days, the samples were thawed, and cell viability was assessed using the MTT technique. Results: The analysis of ADMSCs, after 1 and 3 months of freezing, indicated that samples treated with L-proline + trehalose showed similar viability to those preserved with DMSO and SFB (p=0.444). Conclusion: The association of L-proline and trehalose kept ADMSC viable for 30 and 90 days of freezing, and could be an alternative as a cellular cryopreservative without toxicity and enabling the use of serial fat grafting.
RESUMEN
Neste estudo foram identificadas espécies de Candida em isolados de secreção vaginal, avaliados os perfis de suscetibilidade in vitro a antifúngicos e correlacionados com os antifúngicos prescritos para pacientes em um serviço de atenção primária. A identificação das espécies pela Reação em Cadeia da Polimerase mostrou que 36,5% dos isolados foram caracterizados como espécie não-C.albicans. Nos testes de sensibilidade a maioria dos isolados foi suscetível a cetoconazol, fluconazol e itraconazol, contudo cerca de 40% e 50% apresentaram resistência ou sensibilidade dose-dependente a miconazol e nistatina, respectivamente. A análise dos fármacos prescritos para as pacientes revelou que 34,2% dos isolados foram considerados resistentes aos agentes utilizados no tratamento. Diversas espécies de Candida podem causar vulvovaginite com variados perfis de suscetibilidade aos antifúngicos comumente utilizados no tratamento. A identificação das espécies de Candida é relevante para o gerenciamento epidemiológico das infecções, além de ser útil, assim como os testes de suscetibilidade, na escolha do tratamento farmacológico mais eficaz para a paciente.
In this study were identified Candida species from vaginal secretion isolates, evaluated their in vitro antifungal susceptibilities, and correlated these features with antifungal agents prescribed for patients assisted in a primary care service. Species identification by Polymerase Chain Reaction showed that 36.5% of isolates were characterized as non-C. albicans species. In antifungal susceptibility tests most isolates were susceptible to ketoconazole, fluconazole, and itraconazole, although between 40% and 50% of isolates show resistance or dose-dependent susceptibility to miconazole and nystatin, respectively. Analysis of drugs prescribed to patients revealed that 34.2% of the isolates were considered resistant to agents used in treatment. Several Candida species can cause vulvovaginitis and exhibit different susceptibility profiles to antifungal drugs used in treatment. The identification of Candida species is relevant and useful to the epidemiological management of infections. The antifungal susceptibility test may also be useful for choosing most effective drug treatment for each patient.
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Introdução: A lipoenxertia é uma alternativa com importante aplicabilidade para reconstrução de mama e/ou correções de assimetrias decorrentes do tratamento oncológico. Esta técnica consiste na transferência de gordura autóloga, cujo estroma contém células-tronco derivadas do tecido adiposo que tem capacidade de diferenciar-se em toda a linhagem mesodermal. Para o preparo do tecido adiposo, Coleman fundamentou a centrifugação, de material aspirado por seringa, em 3000 rotações por minuto (rpm) durante 3 minutos. Contudo, estudos questionam se velocidades menores de centrifugação poderiam ser menos deletérias para viabilidade celular. Métodos: Foi realizado um estudo experimental, onde foram avaliadas as células adiposas de seis pacientes; a partir de 60mL de lipoaspirado de cada um. A amostra coletada foi fracionada em quatro tubos, e submetidos a diferentes protocolos, decantação e centrifugação nas velocidades 500, 1000 e 3000rpm por 3 minutos. Após as amostras foram processadas com colagenase IA por 30 min, submetidas ao cultivo celular por 24 horas e realizado a análise da viabilidade celular. Os resultados foram tabulados e analisados pelo teste ANOVA utilizando os programas Graphpad Prism 6.0® e SAS®. Resultados: A viabilidade celular foi maior na amostra celular centrifugada a 3000rpm e menor na amostra decantada. A coloração com Giemsa indicou manutenção da morfologia celular entre as amostras. Conclusão: As células centrifugadas na velocidade de 3000rpm apresentaram maior viabilidade celular. A centrifugação foi efetiva na compactação do tecido e eliminação de resíduos indesejados (sangue e óleo residual).
Introduction: Lipografting is an alternative with important applicability for breast reconstruction and/or corrections of asymmetries resulting from cancer treatment. This technique consists of autologous fat transfer, whose stroma contains stem cells derived from adipose tissue that can differentiate itself throughout the mesodermal lineage. For adipose tissue preparation, Coleman-based centrifugation of syringe-aspirated material at 3000 revolutions per minute (rpm) for 3 minutes. However, studies question whether lower centrifugation speeds could be less harmful to cell viability. Methods: An experimental study was conducted to evaluate the adipose cells of six patients; from 60mL of liposuction of each one. The sample collected was fractionated into four tubes and submitted to different protocols, decanting and centrifugation at speeds 500, 1000, and 3000rpm for 3 minutes. Afterward, the samples were processed with collagenase IA for 30 min, submitted to cell culture for 24 hours, and a cell viability analysis. The results were tabulated and analyzed by the ANOVA test using the Graphpad Prism 6.0® and SAS®. Results: Cell viability was higher in the cell sample centrifuged at 3000rpm and lower in the decanted sample. Giemsa staining indicated maintenance of cell morphology on the samples. Conclusion: Centrifuged cells at a speed of 3000rpm showed higher cell viability. Centrifugation was effective in compacting tissue and eliminating unwanted waste (blood and residual oil).